News

新聞資訊

全部分類



公司新聞

行(xíng)業新聞

首頁

磁珠法全血提取過程應注意哪些(xiē)問題

發布時(shí)間(jiān)：

2023-10-17 10:52

實驗室提取全血核酸，不同人(rén)操作(zuò)，會(huì)有(yǒu)不同的結果，得(de)率或高(gāo)或低(dī)，洗脫或渾濁或發黃等等，會(huì)遇到各種各樣的問題，下面對其中的常見問題進行(xíng)了總結，僅供參考。

1、樣本處理(lǐ)

如是-20°C冷凍保存的樣本，有(yǒu)實驗安排時(shí)提前拿(ná)出血樣，解凍至室溫，過冷或結塊會(huì)影(yǐng)響裂解效果。

2、裂解結合

在裂解過程中，要按照說明(míng)書(shū)上(shàng)進行(xíng)操作(zuò)，不同的上(shàng)樣量對應不同的試劑體(tǐ)系，上(shàng)樣量過多(duō)過少(shǎo)都會(huì)影(yǐng)響裂解的效果。以領駿生(shēng)物開(kāi)發的全血基因組DNA提取試劑（磁珠法）為(wèi)例，上(shàng)樣量為(wèi)200ul，配合的裂解液用量為(wèi)400ul，這樣的搭配為(wèi)最佳。無論是手工操作(zuò)還(hái)是上(shàng)機，不可(kě)避免有(yǒu)人(rén)為(wèi)因素，加樣過程中就要統一動作(zuò)、快速并準确加樣，以此減少(shǎo)誤差。由于有(yǒu)些(xiē)客戶的實驗，需要高(gāo)産量，他們就會(huì)慣性的認為(wèi)，等比例加大(dà)試劑就可(kě)以。其實是不是這樣的，在實際操作(zuò)中，不能簡單的放大(dà)裂解體(tǐ)系，需要根據裂解液對樣品裂解效率進行(xíng)優化，将上(shàng)樣體(tǐ)積濃縮後，才可(kě)進行(xíng)磁珠法操作(zuò)流程的優化。

3、洗滌

樣本經過裂解之後，在洗滌過程中，磁珠結團是經常遇到的現象，尤其手工操作(zuò)時(shí)，這是由磁珠本身特性和(hé)磁珠所處試劑環境兩方面造成的，有(yǒu)些(xiē)磁珠不僅在全血DNA提取過程中會(huì)結團，其他的樣本也同樣會(huì)結團，其實結團現象可(kě)以用來(lái)提前預判實驗結果，結團往往是吸附了大(dà)量核酸，如果哪次實驗沒有(yǒu)結團，本次的實驗結果或許會(huì)不太好，不過也不能一概而論，雜質太多(duō)也是引起磁珠結團的原因。通(tōng)過修改試劑配方，優化試劑用量，可(kě)以改善磁珠的結團現象，這就需要對各種參數(shù)進行(xíng)調整。

4、洗脫

得(de)率是影(yǐng)響下遊實驗的最直接因素，根據我們的經驗，200ul的全血，得(de)率一般在10ug以上(shàng)，但(dàn)是有(yǒu)時(shí)實驗的結果隻有(yǒu)2ug左右，甚至更低(dī)，這樣的結果可(kě)能是兩方面導緻的，第一是裂解，第二是洗脫。若是裂解過程的問題，可(kě)能是裂解不充分，在洗滌的時(shí)候上(shàng)清液顔色會(huì)發黃、發紅，這種情況下，可(kě)以提高(gāo)裂解溫度，或者增加裂解液使用量。洗脫環節的問題，經常表現為(wèi)結團的磁珠未被打散，或有(yǒu)挂壁現象，磁珠有(yǒu)滞留，從而減少(shǎo)了核酸的含量，可(kě)考慮加大(dà)震蕩力度，或用槍頭吹吸解決。

【實驗案例】

案例1：

同一批次試劑提取不同健康人(rén)新鮮血樣的實驗結果：

樣本序号	樣本	A260/A280	A260/A230	Conc.(ng/µL)
1	1号血樣	1.80	1.89	75.7
2	2号血樣	1.89	1.89	73.9
3	3号血樣	1.83	1.93	68.2
4	4号血樣	1.82	1.90	67.9
5	5号血樣	1.84	1.99	59.1

電(diàn)泳圖如下：

結果分析：試劑的提取效果很(hěn)好（提取産物純度好、濃度高(gāo)、電(diàn)泳條帶完整）

案例2：

不同批次試劑提取同一豬血樣本的實驗結果：

試劑批号	A260/A280	A260/A230	Conc.(ng/µL)
批次1	1.87	1.90	157.5
批次1	1.87	1.96	137.9
平均值	1.87	1.93	147.7
批次2	1.88	1.92	132.6
批次2	1.88	1.99	140.4
平均值	1.88	1.96	136.5
批次3	1.89	1.95	141.2
批次3	1.89	1.91	141.7
平均值	1.89	1.93	141.4

結果分析：由上(shàng)圖可(kě)以看出，提取試劑批次間(jiān)差異小(xiǎo)。

未因生物科技（上海）有限公司成立于2016年，位于上(shàng)海市青浦區(qū)張江雲立方園區(qū)。公司長期緻力于生(shēng)物領域內(nèi)相關産品的研發、生(shēng)産和(hé)銷售，産品主要包括磁性納米材料和(hé)磁珠法核酸提取純化試劑。公司一直堅持以“質量、誠信、團結、奮進”為(wèi)宗旨，嚴格規範質量管理(lǐ)體(tǐ)系，持續創新、精益求精，為(wèi)客戶提供優質的産品和(hé)服務,被認定為(wèi)國家(jiā)級高(gāo)新技(jì)術(shù)企業和(hé)上(shàng)海市專精特新企業。