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體(tǐ)外診斷中常見核酸提取純化方法有(yǒu)哪些(xiē)

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2024-04-11 14:57

體(tǐ)外診斷中常見核酸提取純化方法有(yǒu)哪些(xiē)

體(tǐ)外診斷，是指在人(rén)體(tǐ)之外，通(tōng)過對人(rén)體(tǐ)樣本(血液、體(tǐ)液、組織等)進行(xíng)檢測而獲取臨床診斷信息，進而判斷疾病或機體(tǐ)功能的産品和(hé)服務。而檢測人(rén)體(tǐ)樣本的關鍵步驟之一，即是樣本中的核酸（DNA和(hé)RNA）純化。核酸純化的方法是影(yǐng)響所提取核酸質量的重要因素，隻有(yǒu)高(gāo)質量的核酸才能滿足下遊的各種應用。核酸是分子生(shēng)物學的基礎，而核酸提取是核酸檢測乃至于整個(gè)分子行(xíng)業繞不過去的門(mén)檻，很(hěn)多(duō)時(shí)候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測結果的有(yǒu)效性。

為(wèi)什麽需要核酸提取？

核酸提取為(wèi)大(dà)量廣泛研究和(hé)應用提供了答(dá)案，獲得(de)的核酸可(kě)以多(duō)種方式進行(xíng)應用。準确的研究目的，決定了要提取的核酸類型；核酸的應用往往影(yǐng)響提取方法的選擇。為(wèi)了确定好的研究方法，有(yǒu)必要清楚了解核酸的下遊應用以及任何與樣品類型相關的潛在限制(zhì)。雖然依據樣品類型，細胞裂解方式不同，但(dàn)整體(tǐ)的核酸提取核心原則不變：細胞或組織樣品裂解，去除非核酸污染物。

核酸提取純化原則和(hé)要求

1、保證核酸一級結構的完整性；

2、排除其它分子的污染（如提取DNA時(shí)排除RNA的幹擾）；

3、核酸樣品中不存在對酶有(yǒu)抑制(zhì)作(zuò)用的有(yǒu)機溶劑和(hé)過高(gāo)濃度的金屬離子；

4、降低(dī)生(shēng)物大(dà)分子如蛋白質、多(duō)糖和(hé)脂類分子的污染。

常見核酸提取純化方法

1、苯酚氯仿抽提法

苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質的變性劑，反複抽提，使蛋白質變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)将細胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質或多(duō)肽或小(xiǎo)肽分子，變性降解蛋白，使DNA從細胞核中遊離出來(lái)，DNA易溶于水(shuǐ)，不溶于有(yǒu)機溶劑。蛋白質分子表面帶有(yǒu)親水(shuǐ)基團，也容易進行(xíng)水(shuǐ)合作(zuò)用，并在表面形成一層水(shuǐ)化層，使蛋白質分子能順利地進入到水(shuǐ)溶液中形成穩定的膠體(tǐ)溶液。當有(yǒu)機溶液存在時(shí)，蛋白質的這種膠體(tǐ)穩定性遭到破壞，變性沉澱。離心後有(yǒu)機溶劑在試管底層(有(yǒu)機相)，DNA存在于上(shàng)層水(shuǐ)相中，蛋白質則沉澱于兩相之間(jiān)。利用萃取原理(lǐ)，根據蛋白核酸溶于不同的試劑層，将槍頭伸入不同液層內(nèi)抽取所需的成分，經多(duō)次洗滌後獲得(de)純化核酸。

缺點是由于使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大(dà)，長時(shí)間(jiān)操作(zuò)對人(rén)員健康有(yǒu)較大(dà)影(yǐng)響，而且核酸的回收率較低(dī)，損失量較大(dà)，由于操作(zuò)體(tǐ)系大(dà)，不同實驗人(rén)員操作(zuò)重複性差，不利于保護RNA，很(hěn)難進行(xíng)微量化的操作(zuò)。

2、離心柱法

此種方法是利用核酸表面會(huì)覆蓋一層由水(shuǐ)分子構成的薄膜，在高(gāo)鹽環境下，這層親水(shuǐ)膜會(huì)遭到破壞從而核酸可(kě)被吸附在離心柱上(shàng)，而其他雜質如蛋白質、代謝産物等則會(huì)被離心沉澱與核酸分離。但(dàn)即便如此，離心柱純化法仍存在缺點：

（1）高(gāo)度依賴吸附膜的結合能力；

（2）洗脫不完全導緻核酸流失；

（3）無法大(dà)量提取核酸。

3、磁珠法核酸分離技(jì)術(shù)

攜帶正電(diàn)荷的磁珠易于吸附負電(diàn)荷的核酸。一般而言，将樣品與結合緩沖液和(hé)磁珠混合，核酸與磁珠結合後，經過洗滌與磁場(chǎng)捕獲，洗脫下來(lái)的核酸可(kě)通(tōng)過PCR等其它特定方法來(lái)檢測特定的DNA或RNA。磁分離法廣泛應用于診斷行(xíng)業，且能實現高(gāo)通(tōng)量、自動化的核酸提取方法。

不同類型基因檢測均會(huì)涉及到核酸的提取和(hé)純化步驟。核酸提取純化的方法中，液體(tǐ)法和(hé)離心柱法均會(huì)涉及到有(yǒu)毒有(yǒu)機物的使用，對環境和(hé)實驗操作(zuò)者均存在一定的危害。磁珠法核酸提取試劑盒，其中裂解液可(kě)以快速裂解樣品，使樣品的 DNA 遊離在溶液中，通(tōng)過特異性吸附與磁珠結合，經過洗滌過程除去無機物、有(yǒu)機物等雜質，使用洗脫液将核酸從磁珠上(shàng)洗脫下來(lái)，且不使用苯酚、氯仿等有(yǒu)毒試劑；操作(zuò)簡單方便，全過程僅在一個(gè)離心管內(nèi)完成，避免微量樣品的損失，且不容易交叉污染；兼容性廣，适用于常見的分子生(shēng)物學樣品，包括細菌、昆蟲、各種動物組織、口腔細胞、毛發、組織中的細菌和(hé)病毒、植物組織等；從操作(zuò)方面來(lái)分析，利用磁珠固液相快速分離的特性，實現簡便快速的操作(zuò)，也促進了自動化的進程和(hé)應用的推廣。

我司具有(yǒu)多(duō)款磁珠法核酸提取試劑盒，例：核酸提取試劑（磁珠法）、DNA/RNA提取試劑（磁珠法）、DNA提取試劑（磁珠法）、總RNA提取試劑（磁珠法）等，各種試劑盒适用于多(duō)種樣本，例如：動物組織、植物葉片、植物種子、細菌、血清、血漿、血塊、唾液、糞便等。

未因生物科技（上海）有限公司成立于2016年，位于上(shàng)海市青浦區(qū)張江雲立方園區(qū)。公司長期緻力于生(shēng)物領域內(nèi)相關産品的研發、生(shēng)産和(hé)銷售，産品主要包括磁性納米材料和(hé)磁珠法核酸提取純化試劑。公司一直堅持以“質量、誠信、團結、奮進”為(wèi)宗旨，嚴格規範質量管理(lǐ)體(tǐ)系，持續創新、精益求精，為(wèi)客戶提供優質的産品和(hé)服務。