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磁珠法核酸提取過程中常見的誤區(qū)有(yǒu)哪些(xiē)

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2023-12-13 09:12

磁珠法核酸提取過程中常見的誤區(qū)有(yǒu)哪些(xiē)

使用生(shēng)物磁珠法提取核酸，在國內(nèi)還(hái)屬于較為(wèi)新穎的核酸提取方式，相比于傳統的氯仿異戊醇抽提法和(hé)離心柱試劑盒法，這種方法還(hái)有(yǒu)很(hěn)多(duō)人(rén)不甚了解，在使用磁珠法提純核酸的過程中，也存在着一些(xiē)誤區(qū)。

誤區(qū)一：磁珠使用越多(duō)，提取效果越好

提取效果不佳時(shí)，實驗人(rén)員會(huì)考慮增加磁珠的用量，認為(wèi)磁珠多(duō)加一點，可(kě)以吸附更多(duō)的核酸，但(dàn)這種想法是不可(kě)取的。

磁珠的主要特點是既可(kě)以分散于液體(tǐ)中，也可(kě)以在外加磁場(chǎng)作(zuò)用下使固液相分離，任何試劑體(tǐ)系，磁珠和(hé)液體(tǐ)的比例都應該是有(yǒu)一定阈值的，超過一定的比例，過多(duō)的磁珠将因為(wèi)無法均勻分散于液體(tǐ)中，而喪失其分散的特性，也使得(de)洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和(hé)液體(tǐ)接觸的效率。而過量的磁珠也會(huì)吸附更多(duō)的雜質，對于除雜的效果影(yǐng)響非常大(dà)。甚至有(yǒu)些(xiē)時(shí)候，過多(duō)的磁珠會(huì)吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體(tǐ)體(tǐ)系中起主要作(zuò)用的功能成分，導緻整個(gè)試劑盒效率低(dī)下。有(yǒu)很(hěn)多(duō)時(shí)候，在提取效果不佳的時(shí)候，減少(shǎo)磁珠使用量，反而是提升提取效果的好途徑。

誤區(qū)二：試劑使用的越多(duō)，提取效果越好

裂解效果不好？增加裂解液使用量。這是很(hěn)多(duō)客戶在使用試劑盒中的慣性思維，但(dàn)是對于磁珠法而言，每增加一部分液體(tǐ)體(tǐ)積，減少(shǎo)了更多(duō)的磁珠碰撞幾率，而降低(dī)磁珠碰撞幾率，會(huì)導緻吸附率的大(dà)幅度下降。所以很(hěn)多(duō)時(shí)候，雖然增加裂解液和(hé)洗滌液确實能夠起到增強裂解和(hé)增強洗滌的作(zuò)用，但(dàn)磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用量改善提取效果并不一定完全有(yǒu)效。

誤區(qū)三：洗滌次數(shù)越多(duō)，提取效果越好

提取得(de)到的核酸雜質過多(duō)時(shí)，使用者會(huì)考慮多(duō)進行(xíng)幾次洗滌，以得(de)到更為(wèi)純淨的核酸。增加洗滌次數(shù)确實有(yǒu)利于提純核酸，但(dàn)考慮到每次洗滌都會(huì)損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂的可(kě)能性，所以一般來(lái)說洗滌次數(shù)控制(zhì)在2~4次為(wèi)宜。

誤區(qū)四：樣本取用的越多(duō)，提取效果越好

在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身很(hěn)少(shǎo)的情況下，往往核酸提取效果不好，會(huì)采用多(duō)取樣本的方式增加核酸提取量。但(dàn)簡單地增加樣本取樣量，有(yǒu)時(shí)會(huì)引入過多(duō)的雜質，超出裂解液裂解能力，也會(huì)使提取效率降低(dī)，所以并不推薦通(tōng)過簡單的增加樣本取樣量的方式來(lái)達到增加提取量的目的。

如果确實是由于樣本量不足而引起的提取量過低(dī)，建議在前處理(lǐ)先經過富集或者濃縮步驟再開(kāi)始提取；或者增加裂解的完全性，使更多(duō)的核酸暴露出來(lái)也是一種解決方法。

誤區(qū)五：某一種磁珠好，應該在所有(yǒu)實驗中效果都好

磁珠的種類是多(duō)種多(duō)樣的，粒徑大(dà)小(xiǎo)不同，分散性不同，磁響應時(shí)間(jiān)不同，包被基礎基質不同，外層修飾官能團不同，包被密度不同，官能團臂長不同，會(huì)導緻磁珠特性千差萬别，所以不同磁珠所适應的實驗和(hé)體(tǐ)系也是不同的。像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不完全相同，同樣應用于核酸提取的磁珠，性質也并非完全一緻。

有(yǒu)的磁珠在常量核酸提取中表現出了更高(gāo)的吸附效率，有(yǒu)的磁珠更适用于微量核酸提取，有(yǒu)的磁珠适合偏酸性系列的試劑體(tǐ)系，有(yǒu)的磁珠适合偏堿性系列的試劑體(tǐ)系，有(yǒu)的磁珠磁響應性好但(dàn)是沉降速度快，有(yǒu)的磁珠沉降速度慢但(dàn)是磁響應時(shí)間(jiān)長。很(hěn)少(shǎo)有(yǒu)一種磁珠能适用于所有(yǒu)實驗的情況，除了固定的試劑盒配合，多(duō)數(shù)情況下，磁珠和(hé)試劑體(tǐ)系都要做(zuò)一定時(shí)間(jiān)的配合調整。

誤區(qū)六：和(hé)某種試劑盒對比效果不好，是磁珠不好

很(hěn)多(duō)客戶在篩選磁珠過程中都是在已經成熟試劑體(tǐ)系下，簡單地等量替換磁珠，用于比較磁珠效果。這樣會(huì)很(hěn)容易得(de)出某種磁珠效果不好的結論，但(dàn)實際上(shàng)，由于不同磁珠适合的體(tǐ)系和(hé)用量是不同的，往往需要調整過後才能獲得(de)更好的提取效果。

未因生物科技（上海）有限公司成立于2016年，位于上(shàng)海市青浦區(qū)張江雲立方園區(qū)。公司長期緻力于生(shēng)物領域內(nèi)相關産品的研發、生(shēng)産和(hé)銷售，産品主要包括磁性納米材料和(hé)磁珠法核酸提取純化試劑。公司一直堅持以“質量、誠信、團結、奮進”為(wèi)宗旨，嚴格規範質量管理(lǐ)體(tǐ)系，持續創新、精益求精，為(wèi)客戶提供優質的産品和(hé)服務,被認定為(wèi)高(gāo)新技(jì)術(shù)企業和(hé)上(shàng)海市專精特新企業。