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化學發光酶聯免疫技(jì)術(shù)（雙抗夾心法）

發布時(shí)間(jiān)：

2023-11-15 17:49

化學發光酶聯免疫技(jì)術(shù)（雙抗夾心法）

化學發光免疫分析技(jì)術(shù)（CLIA）：

化學發光免疫分析技(jì)術(shù)是一種高(gāo)度靈敏的分析工具，用于确定樣品中蛋白質和(hé)其他分子的濃度。該技(jì)術(shù)基于抗體(tǐ)-抗原結合的原理(lǐ)，在化學發光底物存在的情況下産生(shēng)光信号。發射的光的強度與樣品中存在的分析物的濃度成正比。

磁珠法化學發光酶聯免疫分析技(jì)術(shù)（ME-CLIEA）：

磁珠法化學發光雙抗體(tǐ)夾心酶聯免疫分析是集磁珠分離技(jì)術(shù)、靈敏的化學發光分析和(hé)特異性抗原抗體(tǐ)免疫分析于一體(tǐ)的檢測技(jì)術(shù)。利用酶标抗體(tǐ)、檢測樣品中的靶抗原、磁珠抗體(tǐ)形成夾心結構，結合狀态（複合物：酶标抗體(tǐ)+目标抗原+磁性顆粒）通(tōng)過磁場(chǎng)分離。将遊離狀态的非目标物質和(hé)酶标抗體(tǐ)分離出來(lái)，加入發光底物進行(xíng)發光反應，通(tōng)過檢測發光強度進行(xíng)定量或定性測定。抗體(tǐ)與目标物質結合，然後利用發光反應來(lái)測量樣品中存在的物質的量。該方法可(kě)用于多(duō)種應用，例如醫(yī)療診斷和(hé)環境測試。此技(jì)術(shù)屬于酶免疫測定的一種。區(qū)别于酶聯免疫定量檢測試劑盒，接着後一步酶反應所用的底物為(wèi)發光劑，通(tōng)過發光反應發出的光在特定的儀器(qì)上(shàng)進行(xíng)測定。CLIEA兩種常用的标記酶，辣根過氧化物酶（HRP）和(hé)堿性磷酸酶（AP）均有(yǒu)其發光底物，由此建立的CLEIA均在臨床檢驗中應用。

圖1 磁珠法酶免（化學發光）測抗原

ME-CLIEA雙抗夾心法檢測抗原

雙抗體(tǐ)夾心法（兩步法）是檢測抗原常用的方法。

圖2 采用雙抗夾心法（兩步法）進行(xíng)化學發光檢測基本原理(lǐ)

操作(zuò)步驟：

①将特異性抗體(tǐ)與固相載體(tǐ)連接，形成固相抗體(tǐ)：洗滌除去未結合的抗體(tǐ)及雜質。

②加受檢标本：使之與固相抗體(tǐ)接觸反應一段時(shí)間(jiān)，讓标本中的抗原與固相載體(tǐ)上(shàng)的抗體(tǐ)結合，形成固相抗原複合物。洗滌除去其他未結合的物質。

③加酶标抗體(tǐ)：使固相免疫複合物上(shàng)的抗原與酶标抗體(tǐ)結合。徹底洗滌未結合的酶标抗體(tǐ)。此時(shí)固相載體(tǐ)上(shàng)帶有(yǒu)的酶量與标本中受檢物質的量成正相關。

④加發光底物：夾心式複合物中的酶催化底物成為(wèi)有(yǒu)色産物。根據顔色反應的程度進行(xíng)該抗原的定性或定量。

ME-CLIEA應用

（1）甲狀腺激素：

T3、T4、hTSH、FT4、FT3、抗TPO、甲狀腺球蛋白、抗甲狀腺球蛋白抗體(tǐ)等。

（2）生(shēng)殖激素：

B-HCG、催乳素、促卵泡激素、促黃體(tǐ)激素、孕酮、雌二醇、非結合雌三醇、甲胎蛋白、睾丸酮、硫酸脫氫異雄酮。

（3）腎上(shàng)腺/垂體(tǐ)激素：

皮質醇、尿皮質醇、人(rén)生(shēng)長激素、甲狀旁腺素、促腎上(shàng)腺皮質激素。

（4）貧血因子：

維生(shēng)素B12、葉酸、紅細胞葉酸、鐵(tiě)蛋白等。

（5）腫瘤标記物：
AFP、CEA、PSA、遊離PSA、CAI9-9、CAI25、CAI5-3等。

（6）感染性疾病：

衣原體(tǐ)抗原、尿衣原體(tǐ)抗原、衣原體(tǐ)抗原确認、弓形體(tǐ)lgG抗體(tǐ)、弓形體(tǐ)lgM抗體(tǐ)、風疹病毒lgG抗體(tǐ)、風疹病毒lgM抗體(tǐ)、巨細胞病毒lgG抗體(tǐ)、巨細胞病毒lgM抗體(tǐ)等。

（7）糖尿病：

胰島素、C肽等。

（8）心血管系統：

肌酸激酶MB同工酶、地高(gāo)辛、肌紅蛋白、肌鈣蛋白-1等。

（9）病毒标記物：

HIVI/2Ab、HbsAg、HBsAg、HbsAb、HCVAb、HAVIgM、HAVAb、HbcAb、HBclgM、HBeAg、HBeAb等。

（10）骨代謝：

骨膠原酶、脫氧吡啶啉等。

（11）過敏性疾病：

總IgE、特異性lgE等。

（12）治療藥物監測：

茶堿、地高(gāo)辛、環孢素、巴比妥等。

未因生物科技（上海）有限公司成立于2016年，位于上(shàng)海市青浦區(qū)張江雲立方園區(qū)。公司長期緻力于生(shēng)物領域內(nèi)相關産品的研發、生(shēng)産和(hé)銷售，産品主要包括磁性納米材料和(hé)磁珠法核酸提取純化試劑。公司一直堅持以“質量、誠信、團結、奮進”為(wèi)宗旨，嚴格規範質量管理(lǐ)體(tǐ)系，持續創新、精益求精，為(wèi)客戶提供優質的産品和(hé)服務,被認定為(wèi)高(gāo)新技(jì)術(shù)企業和(hé)上(shàng)海市專精特新企業。